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浓度测定新选择,助力核酸定量
来源: | 作者:201321492800086 | 发布时间: 63天前 | 171 次浏览 | 分享到:
在分子生物学实验中,核酸定量是必备的一个过程,包括初提产物的核酸(gDNA和Total RNA)质控,或者PCR产品和NGS文库质控。目前常见的定量仪器是Nanodrop和Qubit,前者只需一两微升的样品,不需额外试剂,就可以利用核酸的紫外吸收特性,得到样本浓度值,但当样本为DNA,却混有RNA时定量数据会出现较大偏差;而后者Qubit采用特异荧光染料法,可以特异地与不同种类的核酸链相结合,并在特定波长光源的激发下,发出荧光。Qubit定量可以更加准确,但是需要配套试剂,价格也比较高。

在分子生物学实验中,核酸定量是必备的一个过程,包括初提产物的核酸(gDNA和Total RNA)质控,或者PCR产品和NGS文库质控。目前常见的定量仪器是Nanodrop和Qubit,前者只需一两微升的样品,不需额外试剂,就可以利用核酸的紫外吸收特性,得到样本浓度值,但当样本为DNA,却混有RNA时定量数据会出现较大偏差;而后者Qubit采用特异荧光染料法,可以特异地与不同种类的核酸链相结合,并在特定波长光源的激发下,发出荧光。Qubit定量可以更加准确,但是需要配套试剂,价格也比较高。

Qsep100全自动核酸蛋白分析系统,在原来检测核酸片段长度的功能上增加了浓度定量功能,可以一步解决定性和定量两个步骤,特别适合NGS平台的文库质控流程。

例1:现对一个原浓度样本为6.5ng/ul(Qubit)的文库样本进行定量分析,以2倍梯度,稀释5个梯度,如下:

 
表中数据显示,S2卡夹检测同一个样本的五个不同浓度,所得Avg.size基本一致,最大值和最小值偏差为2.7%; 

以各管稀释倍数的倒数为横坐标 ,各管检测所得的浓度为纵坐标,得到图中的一次函数方程,拟合度R2=0.9989;所测得浓度线性关系良好。 

例2:稳定性测试,对同一个样本分3管做独立检测如下:


表中数据显示,3管样本检测所得Avg.size基本一致,浓度最大值和最小值偏差为1.7%,表明S2卡夹检测同一个样本,3次重复测得的片段分布及浓度定量重复性好,结果稳定