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毛细管电泳引物探针质控第二弹
来源: | 作者:201321492800086 | 发布时间: 269天前 | 748 次浏览 | 分享到:
引物是分子生物学实验中必不可少的部分,它通常是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3’端开始合成新的核酸链。常用的人工合成寡核苷酸探针与引物类似,是一段带有检测标记,且顺序是已知的,与目的基因互补的核酸。

引物是分子生物学实验中必不可少的部分,它通常是人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3’端开始合成新的核酸链。常用的人工合成寡核苷酸探针与引物类似,是一段带有检测标记,且顺序是已知的,与目的基因互补的核酸。


分子生物学实验中经常会因为引物或者探针的问题导致产物扩增不出或者引物二聚体含量很高无法确定产物质量,即使换不同的酶调整退火温度都没有效果,所以扩增前的质控很有必要。前面我们已经提到过(详情查看链接https://mp.weixin.qq.com/s/MzfRLK-b4gh9gPGwaJv8nA)实验室一般采用PAGE方法进行质控,但是整个质检过程比较繁琐复杂,耗时较长,且无法对主带和杂带进行定量分析,更多靠经验判断样本合格与否;有些单位也会采用毛细管电泳-质谱联用(CE-MS)技术来质检Oligo引物,不过质谱仪价位较高,用于引物质控会提高引物合成的成本。Qsep系列全自动毛细管电泳仪有着高分辨率、高灵敏度和通量灵活等特点,在引物和探针质控中有着得天独厚的优势,是进行引物质控的不二选择。


前面的文章中我们已经展示过Qsep系列引物质控的一些相关结果,而最新的小片段ladder为引物和探针质控添砖加瓦(图1),可通过峰图上的片段大小及峰的占比,可以更加直观的看出结果的质量情况(图2,3,4)。

图1 120nt ladder

图2 质量较好引物质控结果

图3 质量较差引物质控结果

图4 探针质控结果